本文摘要：本篇文章是由 《中國實用外科》 發(fā)表的優(yōu)秀醫(yī)學論文，中國實用外科雜志于1981年創(chuàng)刊，當年出版6期，1985年改為月刊。1994年被衛(wèi)生部接納，并報請中國科學技術委員會批準，由《實用外科雜志》更名為《中國實用外科雜志》。由中國醫(yī)師協(xié)會、中國實用醫(yī)學雜志社
本篇文章是由《中國實用外科》發(fā)表的優(yōu)秀醫(yī)學論文，中國實用外科雜志于1981年創(chuàng)刊，當年出版6期，1985年改為月刊。1994年被衛(wèi)生部接納，并報請中國科學技術委員會批準，由《實用外科雜志》更名為《中國實用外科雜志》。由中國醫(yī)師協(xié)會、中國實用醫(yī)學雜志社主辦。編委會由全國31個省(直轄市)、自治區(qū)、特別行政區(qū)的二百多位有影響的專家組成，以指導和協(xié)助編委會工作。
【摘 要】目的 總結網(wǎng)狀纖維染色在病理工作應用中的體會。方法 取活體組織檢查標本進行網(wǎng)狀纖維染色。結果 注意Gomori氏銀氨液的配制質(zhì)量、染色時間、氯化金調(diào)色時間的控制等等可使網(wǎng)狀纖維染色達到理想效果。結論 注意網(wǎng)狀纖維染色過程的各個操作環(huán)節(jié)、可使染色達到滿意效果，在病理診斷中具有積極的意義。
【關鍵詞】網(wǎng)狀纖維染色 應用
網(wǎng)狀纖維是網(wǎng)狀結締組織內(nèi)的一種纖維，由網(wǎng)狀細胞產(chǎn)生，纖維細而有分支，穿行于網(wǎng)狀細胞體和突之間，交錯排列成致密的網(wǎng)狀，故稱之。此種纖維用H.E染色一般不易分辨，若用銀氨溶液浸染能使纖維變成黑色，故又稱嗜銀纖維。網(wǎng)狀纖維多分布在結締組織與其他組織交界處，如基膜的網(wǎng)板、腎小管周圍、毛細血管周圍等等。在造血器官和內(nèi)分泌腺，有較多的網(wǎng)狀纖維構成它們的支架，所以網(wǎng)狀纖維染色應用非常廣泛。常用于顯示和鑒別腫瘤的性質(zhì)和來源，如癌和肉瘤、血管內(nèi)皮瘤和血管外皮瘤等，也可用于觀察和研究癌組織的發(fā)生、發(fā)展及惡性程度;顯示與觀察基底膜的變化，從而有效地判斷其上皮來源，且有助于區(qū)分不同來源的上皮腫瘤;還可用于識別壞死組織的結構及類型等等。因此，作為常規(guī)染色的必要補充，網(wǎng)狀纖維染色在病理診斷中起到重要的輔助作用，是病理染色技術不可缺少的組成部分。網(wǎng)狀纖維染色方法較多，其中最常用的是Gomori法[1]，筆者就工作中積累的經(jīng)驗和體會總結如下。
1 資料和方法
1.1 材料 選自本院病理科活體組織檢查標本，中性福爾馬林固定，石蠟包埋。
1.2 試劑配制 Gomori銀氨液：取10%硝酸銀4滴盛入小量杯中，加入1滴10%氫氧化鈉，即產(chǎn)生灰黑色沉淀;記錄總量，加蒸餾水洗滌沉淀物，傾去上清液，再加入蒸餾水，反復3次，最后加蒸餾水，湊足總量，然后逐滴加濃氨水并不斷搖晃，使混合均勻;至沉淀剛好溶解，加入10%硝酸銀至沉淀再次生成，再滴入1滴至數(shù)滴的濃氨水，觀察沉淀物將溶盡，尚留數(shù)個小顆粒時停止，加蒸餾水3倍后裝入棕色玻璃瓶，密封避光保存?zhèn)溆谩?/p>
1.3 方法[2] ①常規(guī)石蠟切片，脫蠟至水。②入0.25%高錳酸鉀5分鐘，自來水洗。③2%草酸漂白，自來水洗，蒸餾水洗。④2%硫酸鐵銨媒染1分鐘，細水速洗。⑤入Gomori銀氨液1分鐘(加蓋進行)，蒸餾水洗。⑥20%的甲醛溶液還原1分鐘，蒸餾水洗。⑦0.2%氯化金液鏡下觀察調(diào)色1-2分鐘，蒸餾水洗。⑧2%硫代硫酸鈉固定1分鐘，蒸餾水洗，V.G液復染3分鐘。⑨無水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。
2 結果
網(wǎng)狀纖維呈黑色，膠原纖維呈紅色，背景呈黃色。
3 討論
網(wǎng)狀纖維染色中，高錳酸鉀的作用是氧化，使網(wǎng)狀纖維具有選擇性，染色力增強，同時改善背景色調(diào)，減弱銀氨液對胞核的著染，有利于胞核的復染。不經(jīng)氧化的切片，網(wǎng)狀纖維不能很好地顯示出來，故高錳酸鉀存放時間不能過長，以免失去氧化作用。網(wǎng)狀纖維是由含有糖蛋白的膠原蛋白組成，易與氨性銀結合，即帶正電荷的二氨合銀離子被具有嗜銀性物質(zhì)的網(wǎng)狀纖維吸附，再經(jīng)甲醛還原成棕黑色金屬銀，從而使網(wǎng)狀纖維顯色。因此為了得到滿意而穩(wěn)定的染色結果，銀氨液的配制是關鍵，配制時滴入氨水的量要恰當，過多感應下降會使液體過堿，滴染使切片容易脫落，過少則感應上升，浸染效果不好。由于配好的銀氨液很敏感，受光或空氣中的氧的作用后均易解離出銀鹽，故宜用棕色玻璃瓶密封避光保存于4℃冰箱中，不能使用金屬器皿，如現(xiàn)用現(xiàn)配則效果更佳。銀氨液滴染水洗時間也要恰當，采用傾斜流水速洗，否則會產(chǎn)生銀顆粒沉淀，水洗時間過長則影響還原，甲醛是還原劑，能把與網(wǎng)狀纖維的銀氨化合物還原成棕黑色的金屬銀，因此20%甲醛液應經(jīng)常更換。用0.2%氯化金調(diào)色須鏡下控制，如時間短，會增加背景染色;時間長，則會使網(wǎng)狀纖維顏色變淺。網(wǎng)狀纖維具有嗜銀性，而膠原纖維結構疏松，寬孔粗纖維能與酸性染料結合[3]，在通常情況下為鑒別診斷和研究應用需要，同時再進行膠原纖維對比染色，可使色彩分辨更為鮮明、清晰，從而得到鑒別診斷的滿意結果。
在病理診斷及鑒別診斷過程中，HE切片的光鏡觀察是病理診斷的基礎，也是最基本的最主要的手段，但單純用HE染色有時很難判別其病因、組織來源及發(fā)病機制等方面問題，故常需借助其他輔助手段來補充，比如特殊染色、免疫組化染色、電鏡及原位雜交等方法。從而使病理診斷的準確性不斷得到提高，有時這些方法在鑒別診斷上能起決定性作用，其中特染是專門用于顯示某些特定目的物的染色方法，是病理診斷及科學研究領域不可缺少的組成部分。而網(wǎng)狀纖維染色在病理工作中是最常用的特殊染色法，由于網(wǎng)狀纖維分布極為廣泛，多種疾病的病變均會影響網(wǎng)狀纖維，所以網(wǎng)狀纖維染色的結果對病理診斷起到很大作用。
參 考 文 獻
[1]龔志錦，詹镕洲.病理組織制片和染色技術.上海：上�？茖W技術出版社，1994:70-80.
[2]中華醫(yī)學會.臨床技術操作規(guī)范.病理學分冊.北京：人民出版社，2004：134-135.
[3]全國衛(wèi)生專業(yè)技術資格考試專家委員會，病理學技術.北京：人民衛(wèi)生出版社，2009:441.
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